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蛋白双向凝胶电泳图谱解析

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  • TA的每日心情
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    发表于 2018.8.27 10:02:57 | 显示全部楼层 |阅读模式
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    我是用TCA-丙酮法提取的蛋白,IPG strip pH4-7 18cm,蛋白浓度在2.1ug/ul,上样180ul 170ul水化液,平衡液I加0.1g DTT平衡15min,平衡液II加0.25g IAM平衡15min,0.5%的琼脂糖封胶液,考马斯亮兰R-250染色,IEF过程中10000v跑了6h多(64kv多),SDS-PAGE电泳,15mA 30min,38mA 6h。
    结果图谱出现很多横条纹,求懂行的朋友帮忙解决一下问题所在?不胜感激!!!

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    首先,可能是在蛋白提取的过程中样品不纯。 其次,产生横条纹的原因可能是:盐离子浓度过高,或聚焦时间不足。 再次,产生纵条纹的原因可能是:平衡过程中DTT不足。 最后,我个人认为最可能的原因有2点,1、可能使用的过期的药品试剂;2、配溶液使用的水达不到纯度,至少要使用三蒸水。
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  • TA的每日心情

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    发表于 2018.8.27 10:02:58 | 显示全部楼层
    首先,可能是在蛋白提取的过程中样品不纯。
    其次,产生横条纹的原因可能是:盐离子浓度过高,或聚焦时间不足。
    再次,产生纵条纹的原因可能是:平衡过程中DTT不足。
    最后,我个人认为最可能的原因有2点,1、可能使用的过期的药品试剂;2、配溶液使用的水达不到纯度,至少要使用三蒸水。
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  • TA的每日心情

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    发表于 2018.8.27 10:42:14 | 显示全部楼层
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  • TA的每日心情
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    发表于 2018.8.27 11:14:59 | 显示全部楼层
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  • TA的每日心情

    3 天前
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    发表于 2018.10.22 23:37:01 | 显示全部楼层
    这个问题最大可能的原因是盐离子浓度较高,那就是除盐不彻底喽,提取过程是主要原因,注意提取时间,尤其是提取过程注意涡旋混匀再沉淀,手法很关键哦。我的经验是这样,遇到过这样的问题

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    谢谢!  发表于 2018.10.23 09:07
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