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IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down了解一下?

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    发表于 2018.6.1 09:50:59 | 显示全部楼层 |阅读模式
    IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down,这么多单词还分得清吗?这些技术能用来做什么都了解过吗?以上几个实验技术都和蛋白有关,他们之间既有联系又有区别。今天小编主要介绍一下这几个实验技术,嗯,都是知识点。

    免疫沉淀技术

    免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)主要原理是根据抗原和抗体的特异性结合,利用抗体将靶标蛋白(即抗原)分离出来,只是为了检测某一种蛋白的表达情况。co-IP、ChIP、RIP等技术由IP演化而来,可以用来研究与蛋白结合的分子。




    免疫共沉淀技术

    免疫共沉淀技术(co-Immunoprecipitation, co-IP)是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法,通过抗体和已知蛋白结合,从而捕获整个已知蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。
    IP和co-IP的区别在于检测的最终目标是直接与抗体结合的蛋白,还是间接与抗体结合的蛋白。



    染色质免疫共沉淀技术

    染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用,常用来检测转录因子结合位点。利用抗原抗体的特异性结合,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,能够真实地反映结合在DNA序列上的调控蛋白。

    一般包括:细胞固定---染色质断裂---染色质免疫沉淀---交联反应的逆转---DNA的纯化及鉴定。可以用PCR或者高通量测序鉴定DNA与蛋白质的结合情况。




    RNA结合蛋白免疫沉淀技术

    RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RNA Binding Protein ImmunoprecipitationAssay,RIP)主要是用来研究体内、RNA与蛋白结合情况,利用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,通过分离纯化,对结合在复合物上的RNA 进行RT-PCR验证或测序分析。




    Pull-down实验

    主要原理是利用带有标签的已知蛋白作为诱饵蛋白(最常用的是GST标签,即谷胱甘肽巯基转移酶,glutathione S-transferase),诱饵蛋白特异性结合谷胱甘肽亲和树脂,当目的蛋白溶液过柱时,将诱饵蛋白及其相互作用的蛋白复合物捕获。复合物洗脱后,通过蛋白凝胶电泳分析两种蛋白间的相互作用,或者筛选相应的目的蛋白。




    RNA pull down实验

    顾名思义,是研究RNA与蛋白质相互作用的一种技术。利用生物素标记的RNA探针,通过与含有目的蛋白的溶液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。
    复合物可以特异性结合磁珠,从而与孵育液中的其他蛋白分离。复合物洗脱后,通过蛋白凝胶电泳实验,检测特定的RNA与蛋白的结合情况。



    co-IP和pulldown区别

    co-IP研究的是体内自然状态下的蛋白质互作,反应地是比较真实的蛋白质之间的相互作用,而pull down则是通过体外实验,无法得知体内真实的结合情况。co-IP由于沉淀下来的是蛋白复合物,所以不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的,而pull down可以确定目的蛋白和检测蛋白是否可以发生直接相互作用。

    今天的内容就到这啦~

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    原文作者 基迪奥 李白      

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    发表于 2018.6.1 11:27:21 | 显示全部楼层
    NICE!
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    发表于 2018.6.1 15:34:10 | 显示全部楼层
    感谢北神科普蛋白知识
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    发表于 2018.6.2 08:47:37 | 显示全部楼层
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  • TA的每日心情
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    发表于 2018.6.2 23:02:51 | 显示全部楼层
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    发表于 2018.6.3 09:10:01 | 显示全部楼层
    最近正在做相关实验,谢谢分享!
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     楼主| 发表于 2018.6.4 09:24:24 | 显示全部楼层
    pigmorning 发表于 2018.6.1 15:34
    感谢北神科普蛋白知识

    这个是李白写的
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     楼主| 发表于 2018.6.4 09:24:42 | 显示全部楼层
    xqywnx 发表于 2018.6.3 09:10
    最近正在做相关实验,谢谢分享!

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     楼主| 发表于 2018.6.4 09:24:59 | 显示全部楼层
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    这个很好,可以辨清很多概念
    我说今晚月光那么美,你说不是的
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  • TA的每日心情

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    发表于 2018.6.5 09:53:55 | 显示全部楼层
    可是我还没弄太清楚,我觉得应该把他们的共同点和不同点列出来
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     楼主| 发表于 2018.6.5 10:07:43 | 显示全部楼层
    星空 发表于 2018.6.5 09:53
    可是我还没弄太清楚,我觉得应该把他们的共同点和不同点列出来

    好建议
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  • TA的每日心情

    2018.8.15 10:33
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    发表于 2018.6.5 15:21:23 | 显示全部楼层
    感谢楼主,棒棒哒
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     楼主| 发表于 2018.6.6 09:52:56 | 显示全部楼层
    小王同学 发表于 2018.6.5 15:21
    感谢楼主,棒棒哒

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    好棒
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     楼主| 发表于 2019.4.4 09:33:22 | 显示全部楼层

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  • TA的每日心情
    好棒
    7 天前
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    好东西。收藏啦~感谢大神
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